Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐引入

从第一次消失口内自身免疫到消失1型号冠心病药理学病症的重大突破率在成年人时期就有很好的揭示，多个口内自身免疫特征性的成年人中都有70%在血液转换后10周内患上冠心病，而随访15年的成年人这一%-增加到84%。相对之下，占药理学1型号冠心病一半以上的型号1型号冠心病的发作机制还没有得不到充分的科学研究。

越来越多的人开始应用于分期系统设计来表述1型号冠心病的重大突破：个形体在消失多种口内自身免疫时进入第1下一阶段，消失血糖异常时进入第2下一阶段，消失病症时进入第3下一阶段。一些多发口内自身免疫特征性的个形体，在1期和2期，重大突破较很慢，并发展为发作的1型号冠心病。我们之前揭示了一两组在首次检测到多种口内自身免疫样本后有数10年无冠心病的极很慢重大突破者，这两组病症000人少，但理论上特征非常明确。随后，我们发现口内自身抗原依赖性CD8+T蛋白底物在重大突破比较很慢的病症中都理论上不存在，但在近期发作和长期存在的冠心病病症中都很容易检测到。这有可能声称，与重大突破病症相对，这些病症自身免疫底物的调节增强。

早期科学研究声称，尽管调节性T蛋白(Treg)数量正常，但冠心病病症存在一些系统缺陷，其中都包括对IL-2的底物潜能降低。此外，冠心病病症中都的不稳定性CD4+T蛋白有可能对调节极富抵抗性，表现为不稳定性T蛋白的诱导向西移动，自然诱发的Treg和肾脏诱发的可借Treg，以及抗原年中的CD4+T蛋白中都IL-2底物向西移动。本科学研究的目地是揭示了CD4+调节性T蛋白(Treg)在一个大极比较很慢重大突破者中都的理论上特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时长为18-32年。

方法：BOX科学研究是一项以人群为基础的横向科学研究，在21岁此表出院的病症亲属中都检测1型号冠心病的危险因素。我们之前揭示了长期比较很慢重大突破者的理论上特征，他们保持多重口内自身免疫特征性超过10年，但没有消失冠心病的药理学病症，很慢性或非进行性自身免疫。随后，10名继续保持无冠心病并希望备有大量血液样本的比较很慢重大突破者纳入T和B蛋白系统归纳。在目前的科学研究中都，8名很慢重大突破者(SP两组)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁密切关系的口内自身免疫特征性。所有的大多数人都西北面1型号冠心病重大突破的1期，尽管一些人随后失去了口内自身免疫对某些抗原的特征性底物，然而，一名病症已经西北面2期有数6年，但没有消失药理学病症，一名病症被诊断为冠心病，该人脑72岁，在采集实验样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳中都对该酪氨酸进行了单独评量。分离外周血单个核分裂蛋白(PBMCs)，引入多常量流式蛋白法术和T蛋白诱导试验评量酪氨酸中都Treg的频率、性状和系统。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、表征和回归)进行无监督聚类归纳，评量Treg性状。

结果：与保健酪氨酸相对，来自很慢重大突破形体的清醒CD4+T蛋白的监督聚类辨识，激活的清醒CD4+ Treg频率增加，与持续性可借的TNFR相关蛋白(GITR)表达出来增加有关。一名HbA1c升高的病症与重大突破比较很慢者和也就是说的对照两组相对，Treg谱有所不同。系统归纳声称，与保健酪氨酸相对，来自比较很慢重大突破形体的Treg介导的CD4+不稳定性T蛋白诱导显着受损。表现为对不稳定性CD4+T蛋白CD25和CD134表达出来的诱导增加。

左图1 深入的性状归纳辨识，CD4+Treg亚型号在很慢重大突破队列中都增加。由FlowSOM转换成的Treg室，周围在来自所有酪氨酸的活CD4+CD45RA -蛋白上。根据上面物表达出来解剖出10个元簇:清醒T蛋白_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T蛋白;HLA-DR + GITR +清醒T蛋白;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)应用于9个不同Treg上面转换成的10个元簇的MST。每个路由器都有一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在路由器两组周围打磨。每个路由器中都的糕点左图指出单个上面的表达出来级别。(b)每个元聚类的热左图，以辨识整形体上面表达出来。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)转换成左图，以及FlowSOM定位的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对原子量为每个metacluster装有终点站左图(原子量> 0.05%)确定为HD和SP两组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T蛋白(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T蛋白(l)。粉红色橘色都有人口为120人SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 应用于CITRUS的预测号声称，Treg频率的增加是重大突破比较很慢的标志。分级门控(a - f)和玉米归纳(g-k)较为SP大多数人和也就是说的HD大多数人在CD4+CD45RA−T蛋白上的关联性。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群形体的都有性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达出来进行分离，模拟FlowSOM群形体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)两组以及酪氨酸SP 606(粉红色)中都CD25+ cd127的频率摘要左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的装有终点站左图;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)经济作物簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来切变着色，箭头突出的簇被定位为SP和HD队列密切关系的不同。(j)装有终点站左图辨识了在SP(蓝点)和HD(灰点)两组中都，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相对原子量(%-)。(k)直方左图辨识每个簇的性状(粉红色)和Treg上面相对表达出来与历史背景表达出来(橙色);上列，存储器Treg_3;下面偷偷地，存储器Treg_4。历史背景与所有其他簇中都上面的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

左图3 与保健献血者相对，重大突破比较很慢者清醒treg的GITR增加。每个清醒CD4+T蛋白元簇(清醒T蛋白_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T蛋白;HLA-DR + GITR +清醒T蛋白;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个表达出来上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表达出来热左图(sp606不包括在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR表达出来串联，辨识直方左图(c)和摘要左图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(粉红色)所有酪氨酸包括，p< 0.05(橙色)酪氨酸SP 606和也就是说的HD不包括在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR表达出来，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(粉红色)串联，辨识直方左图(e)和摘要左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

左图4 来自比较很慢重大突破的CD4+ treg蛋白控制不稳定性CD4+T蛋白的潜能降低。SP两组用橙色的终点站和橘色指出，HD两组用黑色的终点站和橘色指出，粉红色的终点站/橘色指出酪氨酸sp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被上面为CFSE, Treg按推论的%-滴定。用抗CD3 /28微珠活化蛋白，培育出3在此之后进行流式蛋白法术检测。(a-d)与CD4+接收者者相对应的treg培育出(自形体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培育出。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE诱导多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱导多于。应用于特征性对照(激活的响应蛋白不含treg)近似值诱导多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

左图5 不稳定性CD4+T蛋白对比较很慢重大突破的T蛋白活化的诱导更敏感。SP两组用橙色的终点站和橘色指出，HD两组用黑色的终点站和橘色指出，粉红色的终点站/橘色指出酪氨酸sp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel上面，treg按推论的%-滴定。用抗CD3 /28微珠活化蛋白，培育出3在此之后进行流式蛋白法术(CD25反染)和蛋白因子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者共同培育出。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE诱导花红(b)。(c,d) CD25诱导花红(c)和CD134诱导花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出中都的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

论据：我们得出的论据是，来自比较很慢重大突破子的活化清醒CD4+Treg在GITR表达出来中都得不到了扩张和丰富，强调了进一步科学研究Treg在1型号冠心病风险个形体中都的举例来说的必要性。

原文中有：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28